T淋巴細胞特異性識別抗原后，可被雙活化信號刺激后，通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)啟動有關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，進而發(fā)生增殖，這是淋巴細胞的基本功能，反映了其對抗原的識別和發(fā)生免疫應(yīng)答的能力。

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流式細胞術(shù)，是zui常用的檢測T淋巴細胞活化增殖的方法。接下來一起看看，如何使用流式，簡單快捷的檢測活化的血樣中T淋巴細胞的增殖反應(yīng)？

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艾美捷 EXBio的T淋巴細胞增殖反應(yīng)檢測試劑盒（T-cell BlastoFlowEx Kit）#ED7642?旨在測量活化的全血樣本中T淋巴細胞的增殖反應(yīng)。 該試劑盒使用抗CD3和抗Ki67抗體混合物檢測增殖的淋巴細胞。

T淋巴細胞增殖反應(yīng)檢測試劑盒實驗流程：

1.從培養(yǎng)箱中取出試管，取下并丟棄管蓋。每管中加入25 ul EDTA溶液，混合。

2.在37℃下孵育10分鐘。

3.加入2ml的PBS，混合。400g離心細胞5分鐘，移除上清液。

4.輕輕搖動管子擾亂沉淀。加入2ml的稀釋固定和裂解溶液，混合。室溫下孵育10分鐘。

5.400g離心細胞5分鐘，移除上清液。

6.加入0.5ml稀釋的破膜溶液，混合。室溫下孵育10分鐘。

7.加入2ml的PBS。400g離心細胞5分鐘，移除上清液。

8.加入50 ul的CD3/Ki-67 PE抗體預(yù)混液，混勻，室溫下孵育至少30分鐘。

9.加入2ml PBS。400g離心細胞5分鐘，移除上清液。

10.用0.1-0.3ml的1％甲醛PBS溶液或者稀釋的固定和裂解液（1份固定裂解液液+9份PBS的緩沖液）重懸細胞。在2-8℃下暗室條件下儲存處理后的樣品，直到分析。

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T淋巴細胞增殖反應(yīng)檢測試劑盒結(jié)果展示：

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1.用巨細胞病毒?-IE-1蛋白抗原肽體外刺激巨細胞病毒陽性供體全血

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2.用巨細胞病毒?pp65抗原肽體外刺激巨細胞病毒陽性供體全血

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3.全血在植物血凝素（PHA）管（貨號：ED7634）中刺激，用T細胞BlastoFlowEx試劑盒處理并在流式細胞儀中進行分析。?CD3 + /單細胞的目標亞群顯示為PE熒光的直方圖。根據(jù)刺激陰性對照管（貨號：ED7637）確定Ki-67陰性峰和Ki-67陽性峰之間的區(qū)分線。

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文章來源：艾美捷科技