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百螢 胱天蛋白酶Caspase抑制劑Z-LETD-FMK實(shí)驗(yàn)方案

2023-09-01 10:55 作者:百螢生物  | 我要投稿

一.百螢 胱天蛋白酶Caspase抑制劑Z-LETD-FMK參數(shù)

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分 子 量? ? ??654.69

溶? ????劑? ? ??DMSO

存儲(chǔ)條件 ????在-15攝氏度以下保存,避光防潮

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二.百螢 胱天蛋白酶Caspase抑制劑Z-LETD-FMK概述

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Z-LETD-FMK是一種細(xì)胞滲透性不可逆的caspase蛋白酶8抑制劑,與caspase-8的催化位點(diǎn)結(jié)合,在誘導(dǎo)凋亡中起重要作用。Z-LETD-FMK與caspase-8的結(jié)合抑制了該蛋白酶的活性,使其能夠抑制與caspase-8相關(guān)的凋亡事件。為了抑制細(xì)胞凋亡,應(yīng)在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的同時(shí)添加Z-LETD-FMK。FMK衍生的肽可作為有效的不可逆抑制劑,而不會(huì)增加細(xì)胞毒性作用。

圖1.胱天蛋白酶Caspase抑制劑Z-LETD-FMK化學(xué)結(jié)構(gòu)

三.百螢 胱天蛋白酶Caspase抑制劑Z-LETD-FMK實(shí)驗(yàn)方案

溶液配制

儲(chǔ)備溶液配制

Z-LETD-FMK儲(chǔ)備溶液配制:在Z-LETD-FMK中添加適量的DMSO,制成2-5 mM Z-LETD-FMK儲(chǔ)備液。注意:將未使用的Z-LETD-FMK儲(chǔ)備溶液分裝在-20°C下。

?操作步驟

1.?根據(jù)需要處理樣品以誘導(dǎo)凋亡。

2.?添加Z-LETD-FMK。
注意:我們建議使用終濃度為10-100 μM的Z-LETD-FMK抑制胱天蛋白酶,例如對(duì)caspase-8抑制50 μM。
注意:孵育的佳時(shí)間和濃度需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。

3.?根據(jù)需要對(duì)樣品染色。

4.?用適當(dāng)?shù)膬x器檢測(cè)熒光強(qiáng)度。?


圖示

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圖2.胱天蛋白酶Caspase抑制劑Z-LETD-FMK將Jurkat細(xì)胞已200000個(gè)細(xì)胞/90μL/孔接種在Costar黑色壁/透明底部96孔板中。用1μm星型孢素處理細(xì)胞5小時(shí)。加入Z-LETD-FMK并與星型孢素共孵育。使用 Flexstation 3熒光微板讀數(shù)器(Molecular Device)在 Ex/Em = 540/620nm (Cutoff = 610nm)處測(cè)量熒光強(qiáng)度。



百螢 胱天蛋白酶Caspase抑制劑Z-LETD-FMK實(shí)驗(yàn)方案的評(píng)論 (共 條)

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