十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（英語：sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱SDS-PAGE）是較常用的一種蛋白純化分析技術。SDS-PAGE可根據(jù)不同蛋白質分子所帶電荷的差異及分子大小的不同所產生的不同遷移率將蛋白質分離。如果蛋白質樣品中含有多個蛋白質或者純化蛋白樣品中含有其他雜蛋白，經(jīng)過SDS-PAGE分離后不同的蛋白質會被分離成多個蛋白條帶。如果純化的樣品中只含有同一種蛋白質，蛋白質樣品電泳后，則只顯現(xiàn)一條蛋白條帶。由此SDS-PAGE技術可以對蛋白質樣品的純度進行分析。

SDS-PAGE分析原理

SDS是一種陰離子表面活性劑能打斷蛋白質的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質分子結合成復合物，使蛋白質帶負電荷的量遠遠超過其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質-SDS復合物在電泳時的遷移速度僅由蛋白質分子量決定，不同的蛋白質由于分子量的差異經(jīng)過SDS-PAGE電泳后分離，再經(jīng)由蛋白質染色對蛋白質分離結果進行分析。

蛋白質SDS-PAGE分析流程

1. 蛋白質濃度檢測
2. 樣品處理:?在蛋白樣品中加入等量含有B-巰基乙醇的2x loading buffer，煮沸10分鐘
3. 電泳準備:?配置合適濃度的SDS分離膠，安裝電泳槽，注入1x 電泳液
4. 蛋白質樣品上樣：根據(jù)蛋白質濃度，取適量處理過的蛋白樣品依次加入電泳孔槽內，另外取適量蛋白標準marker加入其他空余孔槽內。
5. 開始電泳:?接通電源，將電壓調至120v，保持恒定電壓。
6. 電泳結束剝離膠:?當溴酚藍遷移至凝膠底部，停止電泳；將蛋白膠取出，并切去濃縮膠和分離膠底部的溴酚藍膠條。
7. 染色:?使用R250染色液對蛋白膠染色1小時
8. 脫色:?使用脫色液對染色的蛋白膠脫色至背景干凈，蛋白條帶清晰可見
9. 拍照分析